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在下方，您能查找到一些客户经常问到关于Praesto Protein A填料的问题。我们尽可能的多的将问题列于下方，但如果不能解除您的疑虑，您可以随时联系我。
应用问题
Purolite提供几种Protein A填料是可以直接作为替代产品的，不需要对GE的填料使用参数进行修改，如缓冲液等的。这些产品包括Mabselect™和Sepharose®系列产品。
Ptorein A是一种非常耐热的蛋白质，即使煮沸之后仍然能保持活性。每批Praesto®AP都经过了微生物负荷测试，并装在抑菌溶液中运输，（20%乙醇，醋酸，pH值5），因此，即使在高温下，密封容器也不会有风险。
建议储存在2 – 8度是一种缓解风险的措施，以尽量减少微生物生长的风险，特别是在最初使用后。但是，在适当的清洁和处理下，在室温下储存在抑菌溶液中不会有任何问题。
在选择醋酸、柠檬酸盐还是甘氨酸时没有明确的理论依据。
醋酸和柠檬酸是常用的缓冲液。乙酸在洗脱pH下的缓冲能力非常小，并且在不增加导电性的情况下很容易滴定(通常是阳离子交换)。0.1 M的醋酸是一个很好的起始点，通常可以得到pH 3.6左右的洗脱液，而且这足以使酸性病毒失活。
柠檬酸具有更大范围的缓冲能力（3pKa‘s），特别适合特定的洗脱液pH对于洗脱过程非常重要的情况下。(但要注意前面的缓冲液和洗脱池的体积会影响洗脱池的pH值)。通常建议浓度为10 – 100mM。
在这两种情况下，pH调节后都会有一些沉淀物。使用 0.22μm深层过滤器进行过滤。
当MAb与蛋白A树脂结合时，通常会引入中间的洗涤步骤。同样，虽然有不同的策略，但原则上，任何改变上样条件都将降低洗脱池中的HCP水平。通常选择2CV pH8的 20mM磷酸+1.0M的NaCl溶液。然后在洗脱前切换至pH7,20mM的磷酸。假如使用0.1M的醋酸进行洗脱，洗脱单克隆抗体后，将洗脱缓冲液增加2-3 CV是足以完成再生的。
基本的CIP方式是0.1M NaOH，15分钟（不足15分钟也要调整流量至15分钟）。然而，为了最大限度地延长生命，可以考虑在不同周期之间采用较温和的CIP，在不同周期之间采用较高的CIP浓度。
在双特异性单克隆抗体或其他新型IgG结构的纯化过程中，从Protein A填料中去除不需要的变异的情况并不罕见。Purolite研发出的均粒琼脂糖填料技术，大大提高了传质率，使洗脱池更加浓缩，提高了分辨率。
我们的碱稳定的Protein A是一种基于C Domain并带有取代物的五聚体。
有许多类型的相互作用-离子，亲水和氢键。
在低pH值下，蛋白质A分子(主要是阿尔法螺旋)的四元结构丢失，IgG被释放。
对于Praesto®AP，我们推荐0.1 M HAc作为洗脱液。如果你已经把它用于洗脱，在用氢氧化钠进行CIP清洗之前，不需要使用HAc洗脱。一些公司在一个周期内使用相对温和的清洁(25- 50mm NaOH)，然后在每个周期之间使用更高的浓度(0.1-0.5 M NaOH)。
首先，重要的是要记住，所有的单克隆抗体都是不同的，这就是为什么没有通用的最优条件适用于所有的单克隆抗体。也就是说，对于蛋白A，最常见的洗脱缓冲液是0.1 M醋酸。
这通常会使得洗脱液的pH值在3.6左右(这可能会根据前面的洗涤缓冲而有所不同)。控制pH值小于3.8，持续30-60分钟为一般病毒失活步骤。其他常用的缓冲液是甘氨酸或柠檬酸缓冲液。
DBC和稳定性会因抗体不同而不同，没有一个通用的建议。假如担心高浓度的环境下沉淀，一个策略就是控制负载量低于50g/L（假如填料DBC高于50g/L）。我们建议使用稍微大一点的柱子，并在较短的停留时间内加载(3-4分钟，30 g/L)。
沉淀通常与pH、电导率和浓度有关。在用标准体系(0.1 M HAc或10-100 mM柠檬酸盐，pH 3.5)洗脱时，通常会看到一些浑浑浊——这是典型的HCP蛋白。如果确实是IgG沉淀，则会导致明显的浊度/沉淀。如果发生IgG沉淀，从最简单的改变开始。首先，调整洗脱液电导率。其次，使用pH梯度洗脱，pH 3- 6的20mM柠檬酸。如果仍然有问题，可以尝试赋形剂。
可以使用小型实验装置，例如1ml HT柱，来测试不同的条件。
如果NaOH造成明显的高压，这通常意味着树脂上还有剩下的蛋白质。
如果在柱上有残留的mAB，我们建议在加载NaOH前用0.2 M乙酸进行低pH洗涤。(还要检查在线过滤器，以确保压力的增加来自树脂)。
如果它们已经进行了酸洗，或者在pH值低于3.5的情况下进行洗脱，我们建议仍然使用0.1 M NaOH，但是通过降低50%的流速来延长接触时间。
注意:这只是一个在不了解使用的确切协议或没有看到色谱图的情况下的粗略指南
一般来说，HCP浓度很难预测，因为它既依赖于测定，也依赖于特定的细胞培养上清液和单抗。典型值为500 – 5000 ppm(即20 mg mAb/ml Protein A中10,000 – 100,000 ng/ml)。
随着时间的推移，对客户最常见的监控变量是背压。
流量必须调整到不超过填料压力的70-80%的背压。液体的选择和液体的粘度就变得无关紧要了。
例如，20%乙醇的粘度是1.94，然后。一般情况下，会导致流量减少一半。
假如你使用20%的乙醇对比使用纯水，在相同的背压下，只达到纯水的一半流量。
疏水性配体(HIC)树脂需要用20%乙醇包装，IEX树脂需要用0.2 M NaCl包装。
结论是柱的运行压力不超过填料压力的70%。这也是FDA所期望的，并在验证树脂寿命时作为一个关键属性使用。
Fc-fusion是一个通用术语，指包含抗体Fc部分的蛋白质，其大小可以是任意的(从50kd到600kd)。因此，与Protein A填料的结合有很大的差异，但几乎所有情况下的能力都低于典型的单克隆抗体。如今，有部分客户使用Jetted A50来结合FC片段，得到很好的结果。如果是一个大的Fc融合，在加载过程中(6-10分钟)以较低的流速运行将可以提高DBC。
我们建议使用 Repligen NGL-ImpactTM A ELISA kit来检测Praesto® Jetted A50, AP & APc.
Protein A填料的洗脱液始终会含有HCP。实践证明部分’麻烦‘的HCP通过非共价碱结合到IgG上。每个一个细胞株和单抗是独一无二的，可以通过不同的清洗条件，以达到最佳的HCP去除效果。最常见的策略是在负载和初始洗涤(PBS)后使用高pH值(8-10)的高盐进行洗涤，紧接着在洗脱前使用低电导率，接近中性pH（6-7）的溶液进行冲洗。
常规问题
目前的参数是 <100，但我们仍在努力突破<20。
目前情况是3年。我们正在进行储存寿命验证，这个数值可能会增加。
对于100升以上的产品，平均交货时间为4周。
对于50升以下的产品，我们通常会备有现货。
我们的内毒素水平与其他市场领先产品相似。
填料生产是不需要cGMP认证的，但在生产中，我们仍然会适当对产品和应用遵循GMP的指导方针。所有相关的国家和国际法规均得到遵守。
树脂的生产必须按照规定的程序进行，所有用于生产的原材料都要记录，对生产过程进行定义并形成文件，即操作人员、数量和操作过程都要记录。
该产品需要根据规范进行定义并发布，如纯度、浓度和其他关键性能特性，这些特性是工艺/产品所要求的，以及与产品及其应用相适应的GMP。
ISO9001:2015
我们的团队拥有世界级的研究人员、聚合物化学家和应用科学家，他们擅长开发新颖的、定制化的产品，以满足客户的不同需求和期望。
无论您需要定制的颗粒大小、官能团、孔隙度或配体密度，Purolite Life Sciences都可以为您提供帮助。
包装问题
最小的包装是25mL，目前最大的容器是20L(里面装有10L填料）。
这是为了满足现场手工搬运的要求，但如果需要，我们可以提供60升以下的包装。
1 – 10L的产品，通常使用大桶。
10- 50mL的产品使用塑料小瓶。
所有的容器都是HDPE材质的。
规格参数
是基于C-domain特有的配基，Repligen根据供货协议供应相应的配基。
我们使用短链间隔，然后通过多点连接连接。由于我们有多个附着点，我们的蛋白质渗漏通常是非常少的。间隔链和偶联的化学稳定性是非常高的 – 甚至能耐0.5molde NaOH环境。
通过尺寸排阻色谱法测定，我们的Praesto®Protein A产品的甲状腺球蛋白(440 kDa)的kAv值通常为0.55 – 0.60。
每个裸球含有极丰富的孔道，是一个常规的琼脂糖填料。
琼脂糖树脂仅由交联的琼脂糖组成。没有嫁接或涂层适用于任何现有的Praesto®产品。
这些裸球是使用专用的交联方法进行交联的。交联所用的化学物质是琼脂糖树脂交联过程中的标准物质。
Purolite Life Sciences为Praesto®系列开发了自己的“高流量琼脂糖”。它与其他市场主导产品相似，但不完全相同——两者的平均粒径都是85微米。
Purolite还有能力生产喷射法生产的均粒琼脂糖填料，这种方法我们成为Jetteing，可以获得均匀颗粒的裸球，有更低的压降。
我们没有看到一个明确填料刚性的区别(45µm / 65µm / 90µm)。
在较小的柱(直径5厘米或者更小)，我们通常建议装填压力4bar，运行压力不超过3bar。大量的数据表明，最佳的压缩因子是1.1-1.2。
Protein A填料有更多开放的孔结构，因此质地不是那么的硬。小柱装填时，建议压力小于2.5bar。装填较大柱体时，建议压缩因子在1.2 – 1.25之间。
使用寿命
原则上讲，Protein A填料在使用过程中有两种减少容量的方式。
第一种是填料污染。如果是这种情况，你通常会看到一个逐渐增加的压力，同时也能观测到逐渐增加的CIP峰值。
另外一种是配体的损失，无论是通过蛋白酶活性的原料或水解氢氧化钠暴露。人们通常忘记了温度的影响，温度对碱性水解速率和蛋白酶活性都有显著的影响(15℃和25℃之间的差异将是巨大的)。
关于颜色，随着使用时间的推移，通常会看到一些变色。在大多数情况下，它对性能没有影响。
有时候这种树脂会看起来像“灰白色”。有几个因素可能会影响这一点，比如颗粒的大小，或者照片是用原料拍摄的。通常颜色与性能的下降无关。
质量控制
是的，我们的系统通过了ISO9001:2015全球标准认证，“QMS”为我们的业务流程提供了一个框架，专注于始终如一地提供满足客户需求的产品和服务，并提高他们的满意度。管理系统的范围涵盖设计、制造和销售过程，确保严格的质量要求得以保持。Purolite Ltd也通过了ISO14001和ISO45001认证。
Purolite Ltd是通过BSi认证的，BSi是全球认证的。
我们客户的要求和我们产品的预期用途是理解“其他”法规和质量要求的关键。因此，我们从制药和医疗保健行业获得指导，如辅料制造商的IPEC-PQG和ICH指南，以协调全球制药行业的技术要求。这些转化为欧盟和FDA CFR21法规的法定要求，对客户的目标市场至关重要。了解这些要求使我们能够提供适合其预期用途的产品和服务。
生产未通过cGMP认证。然而，我们采用IPEC-PQG指南中规定的良好生产规范，我们的产品没有通过药典专论测试，而是通过了行业测试方法。
是的，所有的商业产品都有全面的技术文档支持;包括规格书、分析证书。这些都记录在我们的RSF(法规支持文件)中。
是的，我们所有的产品都是与COA, MSDS和其他监管文件一起装运的，以确保进出口条件的实现。
是的，非标准请求是通过客户在销售订单过程中定义的特殊指令来处理的。
是的，我们的部分QMS Purolite对变更进行记录和控制管理。对于任何重大更改都会发出客户通知。
除非另有规定，我们的产品一般都有5年的保质期。